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高龄人群淋巴细胞亚群和细胞因子的检测分析

发布时间:2022-09-14 09:01:36

  摘    要:目的 对高龄人群淋巴细胞亚群和细胞因子进行检测并分析,探讨高龄人群的机体及免疫衰老情况。方法 回顾性分析2021年12月27日至2022年3月24日于中国人民解放军第八医学中心老年医学科就诊的145例患者一般情况与免疫指标,依据年龄分为高龄组[88.00(85.00,91.00)岁]52例,老年组[68.0(66.0,74.0)岁]52例,中年组[52.00(48.00,56.00)岁]41例,检测并分析3组人群的淋巴细胞亚群和细胞因子。结果 3组人群一般情况(性别、身高、体重、BMI)比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组人群淋巴细胞亚群和细胞因子比较,差异有统计学意义(P<0.05),中年组与老年组之间除外;高龄组淋巴细胞亚群和细胞因子变量间相关性分析显示CD4/CD8与细胞毒/抑制性T细胞百分比、自然杀伤细胞(NK细胞)与总T细胞百分比、CD4/CD8与辅助性/诱导性T细胞百分比、白细胞介素(IL)-6与IL-10均具有相关性。结论 高龄人群免疫系统表现出了进行性衰退,高龄人群中除NK细胞外各淋巴细胞亚群数及百分比呈现出了进行性下降趋势;伴随增龄出现的免疫系统调节能力下降。


  关键词:衰老;免疫系统;淋巴细胞亚群;老年人,80以上;


  Detection and analysis of lymphocyte subpopulations and cytokines in the elderly population


  Peng Cong Wang Liang XiaoLi Xiao Jun Zhang Jinhua Cheng Peng Ma Weifeng Wang


  Tiantian Li Chunhui Tang Yumeng


  Graduate School of Hebei North University


  Abstract:


  Objective The lymphocyte subsets and cytokines of the elderly population were detected and analyzed to explore the body and immune aging of the elderly population.Methods According to the inclusion and exclusion criteria, 145 patients who attended the geriatric department of the Eighth Medical Center of the Chinese People′s Liberation Army during the time period from December 27,2021 to March 24,2022 were retrospectively selected and their general conditions and immune indicators were collected.According to age, they were divided into 52 cases in the senior-age group [88.00(85.00,91.00) years],52 cases in the elderly group [68.0(66.0,74.0) years],and 41 cases in the middle-aged group [52.00(48.00,56.00) years].The lymphocyte subsets and cytokines of the three groups were detected and analyzed.Results Comparing the general conditions(gender, height, weight, BMI) of the three groups, the differences were not statistically significant(P>0.05);the results of lymphocyte subpopulation and cellular multifactor in the three groups indicated that the differences between the three groups were statistically significant(P<0.05),Except between the middle-aged group and the elderly group; correlation analysis between lymphocyte subpopulation and cellular multifactor variables in the senior group showed that CD4/CD8 and cytotoxic/suppressive T cell percentage, NK cells versus total T cell percentage, CD4/CD8 versus helper/inducible T cell percentage, and IL-6 versus IL-10 were significantly correlated.Conclusions The immune system of the elderly population shows a progressive decline, and this paper shows that the number and percentage of lymphocyte subpopulations, except NK cells, show a progressive decline in the elderly population.A decline in the ability of the immune system to regulate the immune system that accompanies aging.


  Keyword:


  Aging; Immune system; Lymphocyte subsets; Aged,80 and over;


  既往研究[1]表明T淋巴细胞亚群在高龄与衰老过程中的改变最为明显,T淋巴细胞亚群失调介导细胞免疫能力下降,这是导致高龄人群可能处于流行性疾病高风险的原因之一。增龄与衰老所致的免疫系统失衡是高龄人群的发病率、获病率及病死率的显著因素[2]。因此对高龄人群的免疫系统评价及分析对指导高龄人群诊疗及健康判断十分重要。本研究对高龄人群淋巴细胞亚群和细胞因子进行检测并分析,探讨高龄人群的机体及免疫衰老情况。


  1 材料与方法


  1.1 一般资料


  回顾性分析2021年12月27日至2022年3月24日于中国人民解放军第八医学中心老年科就诊的145例患者病历资料,年龄范围40~97岁,年龄73.0(59.0,83.0)岁。依据年龄分为高龄组[88.00(85.00,91.00)岁]52例,其中男性32 例,女性20例;老年组[68.0(66.0,74.0)岁]52例,其中男性20例,女性32例;中年组[52.0(48.0,56.0)岁]41例,其中男性20例,女性21例。排除标准:(1)既往存在以骨性损害为特征的骨科疾病;(2)原发性免疫功能障碍性疾病,获得性免疫功能缺陷性疾病、血液系统疾病、精神障碍疾病、3个月内存在重型感染或异体输血;(3)肺癌、肝癌等恶性肿瘤及主要脏器功能衰竭及器官移植患者;(4)1年内服用免疫调节制剂及糖皮质激素或其他激素补充治疗的患者。本研究已通过中国人民解放军总医院第八医学中心伦理审查委员会审查。


  1.2 一般资料收集


  包括既往病史(高血压、糖尿病、冠心病、恶性肿瘤、骨折,急危重症病史、输血史、免疫功能缺陷等)、年龄、性别、身高、体重、体重指数(BMI)。


  1.3 淋巴细胞亚群分析


  将20 μL淋巴细胞亚群检测试剂(CD3/CD8/CD45/CD4/CD16+56/CD19)加到绝对计数管的底部;采用反向移液法吸取50 μL充分混匀的EDTA抗凝全血,加入到绝对计数管底部;震荡混匀后室温避光孵育15 min; 每管加入450 μL溶血素(FACS Lysing solution∶蒸馏水=1∶10),充分混匀后,室温避光孵育15min; 利用FACS Canto Plus流式细胞仪(美国BD)获取和分析淋巴细胞亚群百分比和绝对数。


  1.4 细胞因子分析


  向样品管中加入25 μL实验缓冲液;向样品管中加入25 μL血浆;向样品管中加入25 μL检测抗体;向样品管中加入25 μL捕获微球抗体;室温[(25±1)℃]避光震荡孵育2 h(400~500 r/min);向样品管中加入25 μL SA-PE;室温[(25±1)℃]避光震荡孵育0.5 h(400~500 r/min);向样品管中加入500 μL洗涤缓冲液,涡旋数秒,300~500 g离心5 min, 缓慢倾倒出液体,倒扣于吸水纸上;根据FACS Canto Plus流式细胞仪(美国BD)需求,向每管中加入120 μL洗涤缓冲液;涡旋10 s将微球重悬后立即上机检测,检测后数据导入LEGEND plex v8.0进行分析获取。


  1.5 统计学方法


  采用SPSS 25.0与Rstudio软件对数据进行处理分析。计量资料采用x¯±s或M(P25,P75)表示,计数资料采用例数及百分比表示。使用χ2检验及方差分析比较各组人群一般情况差异是否有统计学意义;使用单因素多元方差分析比较各种淋巴细胞亚群和细胞因子差异是否有统计学意义,对非正态数据应用个案排秩正态得分进行正态化处理,正态转换后应用上述参数检验方法进行统计分析。在Rstudio中应用Pearson相关比较淋巴细胞亚群和细胞因子各变量之间相关性。P<0.05为差异有统计学意义。


  2 结果


  2.1 3组人群一般情况比较


  3组人群性别构成比、身高、体重、BMI,差异无统计学意义(P>0.05),见表1。


  2.2 3组人群淋巴细胞亚群和细胞因子比较


  使用单因素多元方差分析比较3组人群淋巴细胞亚群和细胞因子,结果表示3组间差异有统计学意义(P<0.05),中年组与老年组之间除外(组间差异P=0.051)。其中高龄组中淋巴细胞亚群除自然杀伤细胞(NK细胞)外,均低于老年组及中年组,且随年龄增加进行性下降。而细胞因子中CD4/CD8、白细胞介素(IL)-5、IL-6均据年龄进行性高于其余2组。见表2。


  2.3 高龄组人群淋巴细胞亚群和细胞因子相关性分析


  使用Pearson相关比较淋巴细胞亚群和细胞因子各变量之间相关性,结果显示CD4/CD8与细胞毒/抑制性T细胞百分比、NK细胞与总T细胞百分比、CD4/CD8与辅助性/诱导性T细胞百分比、IL-6与IL-10均具有相关性。见图1。


  3 讨论


  本研究显示,随着年龄增加,尤其在高龄人群中,除NK细胞外,其余各淋巴细胞亚群数及百分比呈现出了进行性下降趋势,这与国外相关研究[3]结果不一致,出现这一情况的机制暂不明确。但IL-6据年龄进行性增加的结果与既往研究保持一致,IL-6具有调节免疫应答、急性期反应及造血功能,在机体抗感染免疫反应中起重要作用,IL-6表达失调可引起许多疾病,故IL-6在较多疾病中都有预测与评价能力,而本研究观察群体IL-6均随年龄进行性增加,提示高龄人群可能存在多种免疫系统高危因素。本研究还观察到高龄人群CD4/CD8、IL-5均高于其余2组,CD4/CD8比值改变与机体免疫能力密切相关,比值降低提示免疫功能低下,该个体多易出现感染或合并多重感染情况,而比值增加常提示存在免疫亢进或排异反应存在,故本文CD4/CD8增加提示高龄人群存在明确地免疫系统调节能力下降,并明显伴随免疫亢进,既往研究表明CD4/CD8比值异常增加能抑制CD8+T细胞的活化、增殖及分泌,且抑制效果与CD4/CD8比值显著相关[4],CD8+T细胞在免疫系统中具有重要地位,CD8+T细胞功能及数量的改变影响了其消除细胞内感染和恶性细胞的关键作用,降低其提供的保护性免疫。而IL-5的升高则提示高龄人群可能存在嗜酸/嗜碱性粒细胞的功能增强及数量上升,这也就解释了高龄人群中过敏性疾病与呼吸道疾病发生率高于普通人群的部分原因[5,6,7,8]。并且在本次研究中还完善了淋巴细胞亚群及细胞因子的相关性分析,提示CD4/CD8与辅助性/诱导性T细胞、CD4/CD8与细胞毒/抑制性T细胞百分比、NK细胞与总T细胞百分比、IL-6与IL-10均具有相关性,其相关机制既往也具有相应报道。


  综上所述,高龄所致免疫衰老造成了免疫系统各组分的功能及成分紊乱,进一步影响了免疫能力,据文献报道免疫系统的衰老在驱动全身衰老方面也具有因果关系,因此免疫调节也是延长健康时间、改善衰老的治疗靶点[9]。


  参考文献


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